荧光定量PCR服务要求
1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料(各种材料的RNA提取量请参照“总RNA 的提取”），或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/ 样品）；（各种材料的DNA提取量请参照“ DNA的提取”），或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/ 样品)。
2. 请通过E-mail提供已知的全长基因序列。
3. 请提供尽可能详细的背景资料：DNA/ RNA来源、丰度等

在我们的实验工作中，如果采用一般实验手段无法得到目的基因时，可以进行实验室人工合成。闪晶公司提供全基因合成服务，具体情况如下。
全基因合成服务要求
1. 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知闪晶公司的业务员或闪晶公司的技术员。
2. 请说明实验的具体要求，如：使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。

全基因合成操作程序
1. 我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列。根据序列的具体情况设 计合成方案并通过业务员或技术员给您报价。
2. 在得到您认可后我们将立即进行单链 Oligo DNA 合成、 DNA 片段拼接等工作，然后把全长基因克隆于载体 中，再通过 DNA 测序确认合成基因的正确性。
3. 测序结果如果发现有 错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。
4. 提供实验结果：包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。免费提供密码子优化！！

多肽合成服务价格（大宗用户价格面议,电话:021-54460831）

重量/纯度

粗品

脱盐

75%

85%

90%

95%

98%

10-20mg

￥50

￥60

￥90

￥120

￥160

￥180

￥260

21-30mg

￥60

￥70

￥105

￥140

￥175

￥210

￥320

31-40mg

￥70

￥80

￥120

￥160

￥200

￥260

￥380

41-50mg

￥80

￥90

￥135

￥180

￥225

￥270

￥400

51-60mg

￥90

￥100

￥150

￥200

￥250

￥300

￥550

61-70mg

￥100

￥110

￥165

￥220

￥275

￥330

￥600

71-80mg

￥110

￥120

￥180

￥240

￥300

￥360

￥660

81-90mg

￥120

￥130

￥195

￥260

￥325

￥390

￥720

91-100mg

￥130

￥140

￥210

￥280

￥380

￥420

￥800

用途

主要用于抗体的制备、多肽疫苗、多肽微注射及对基因结构与功能关系的研究。

说明

• 多肽合成价格原则上以每个氨基酸残基数计， “aa” 代表 “ 氨基酸残基 ” ； 含有特殊结构的肽链或 aa ，如 -(-S-S-)- 、非天然 aa 、修饰 aa 等，价格需要协商。

• 上述价格为参考价，确定的价格视多肽序列将作上、下变动，其中少于 6 个 aa 的 按 6 个 aa 计算。

• 闪晶 可为客户免费进行 C18 脱盐纯化，但大多数用于抗体制备的多肽都可以不必特殊纯化（ HPLC ）。

• 发货时间一般为 4 周，具体情况应视序列长短、合成的难易及纯化的难易，再与客户协商。

• 请在订单中写明多肽序列、数量、纯度及特殊要求。

• 闪晶生产的多肽产品都提供相应的纯度分析图（ HPLC ）如果需要做分子量鉴定，可进一步做质谱图。

注：制备多肽的一个很大用途是制备多肽抗体，但因多肽的分子量相对较小，所以免疫原性较差，人们通常用BSA或者KLH与之偶連，但这种方法比较传统也不方便，闪晶生物推出MAP多肽，即在合成多肽时，C端偶連上MAP，而MAP是没有免疫原性的Lys结构,即在MAP上可以形成4个或8个抗原性多肽。multiple antigenic peptide结构如下图：闪晶生物同时免费提供抗原设计服务

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

闪晶生物为您提供全套免疫印迹(western blot)技术服务和相关的试剂耗材。主要实验步骤如下：

蛋白质抽提
实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
实验对象为细胞样品(细胞培养)，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。
5. western blot膜的封闭和抗体孵育

膜在5％脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
6. western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。
更详细的操作说明
Western Blot操作规程 预染彩虹蛋白Marker（10~180kDa）

SDS-Page预制胶

western blot费用：每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可以做8个样品。每张膜的费用是：1500.00元。一抗另计，其它试剂免费，一抗订购时间约为3周。乘车路线：火车站坐1号地铁到终点站，然后换5号地铁坐到北桥站即可。
时间：约2－3周。

步骤1. 目标基因全基因合成：

从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们免费提供给客户。
根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
合成设计好的基因序列。
提供给客户：目标基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。
价格：3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用．
时间：2~3周，根据基因的大小而定.详见全基因合成服务
步骤2. 目标基因亚克隆：

扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
测序验证构建质粒的准确性。
闪晶生物免费提供如下表达载体：
提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格：免费　
时间：1-2周
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：

扩增并抽提构建好的表达质粒。
将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
价格：免费
时间：1周
步骤4. 目标蛋白表达及纯化：

摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供给客户：纯化好的目标蛋白1~5mg及纯化报告

抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构，叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇，因而使机体产生好几种不同的抗体，最终产生出抗体是浆细胞。只针对一个抗原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系，纯系的英文为Clone，音译就是克隆。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。

根据宿主动物的不同,可以形成鼠抗,兔抗,羊抗等.目前闪晶公司可以提供小鼠、大鼠、兔、鸡、羊、猪等动物作为宿主动物.

1.抗原的制备费用:

A.如果客户自己提供蛋白,那么要求提供纯度>85%,质量2-5mg的蛋白.

B.如果客户无法提供蛋白,仅能提供PCR产物或者提供构建好的质粒,那么如果是原核表达,费用为3000.00元;如果是真核表达,费用为8000.00元.时间约为1-1.5个月.详见全基因合成,如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们免费提供给客户。

C.如果客户只知道蛋白序列,其它的都不能提供,闪晶生物用自主知识产权的抗原肽设计软件帮客户设计抗原肽,然后用Map修饰后进行免疫.闪晶生物通常帮客户设计一条抗原肽或者三条抗原肽,如果客户选择一条肽,费用为1500.00元;如果选择三条肽,费用为4000.00元,时间约为2周.详见多肽合成

2.免疫动物,抗血清制备,费用3000.00元,时间约为3个月.如果是选择羊或猪,需要再加1500.00元.

3.抗体纯化费用:Protein A或者Protein G,特异性抗原亲和纯化多克隆抗体,费用为3000.00元,时间约为2周.

最终提供

1.1ml免疫前的血清
2.鼠(2ml抗血清),兔(100ml抗血清),羊(1L抗血清）
3.ELISA检测报告，效价大于1:10000
4.Western Blot检测，抗体(使用终浓度1ug/ml）检测10pg或者10pg以下的表达抗原或者BSA-多肽交联产物.
5.如果要亲和纯化的，最终提供1-5mg,纯度大于85%抗原亲和纯化抗体

UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)

编号

规格

售价￥
ZP00501

100U

250
ZP00502

500U

1200
ZP00503

1000U

2200
　
相关试剂
抽提试剂盒...
反转录试剂盒...
dNTPs...
Taq酶...
荧光定量试剂盒...
枪头、离心管...
UNG酶用途

因PCR是一种极敏感的扩增技术，易受污染的影响。小量的外源 DNA 污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染，这称之为残余污染；从其他样品中纯化的 DNA 或克隆的 DNA 也会是污染源。卫生部已经明确规定，凡是用于临床检验的PCR试剂，都应该有 UNG酶技术，以防止污染。

控制污染的方法主要有两种：

1 、在 PCR 实验过程中使用良好的实验步骤和实验环境减少残余污染：使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入 eppendorf 管内；为 PCR 样品配制和扩增后分析设计隔离的区域；在准备新反应前更换手套；总是使用不含有模板的阴性对照检测污染；使用预先混合的反应成分，而不是每个反应的每个试剂单独加入。

• 使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶）移除 DNA 中的尿嘧啶，在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶，这种产物对 UNG 敏感，所有可以在PCR前对新配制的反应用 UNG 处理以破坏残余产物，杜绝污染。

UNG酶特征

• 克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

• 50ul 体系中，加入0.1U的UNG酶，能够消除 10 7 带有 dUTP 的、大于 6 个碱基的双链DNA 污染。

• 反应条件： 37℃ ，2分钟；反应 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以灭活。

为解决生物样本处理过程中保存期短的问题，SUPELCO 公司推出新一代高效生物防腐剂
ProClin150，200，300，5000，可以有效地控制体外诊断试剂中微生物的生长。当浓度达到 0.02%
条件下，ProClin 系列防腐剂具有广谱抗菌活性，能在比较长的时间内抑制细菌、真菌和酵母菌
等微生物的生长；同时，它又能保持体系中酶的活性，因此它是一种理想的可替代硫汞撒、叠氮
化钠和庆大霉素等生物防腐剂。
一、ProClin 系列防腐剂的优点
• 广谱抗菌性，作用速度快；良好的与酶的相容性，不会影响与酶或抗体的相关反应。
• 使用剂量少，6-20ppm 的 ProClin300 即可达到抑菌的目的。
• pH 适用范围广（pH2-8.5*
）,化学稳定性好。经实验室检测，在 25 度下保存 2 年，该防
腐剂的活性组分仅损失 3%。
• 毒性远低于同类产品硫柳汞。
• 与水可以任意比混合。

产品用途：
96联适合KingFisher Flex、Qiagen Biosprint 96、ABI MagMax
主要用在核酸提取仪上，实现磁珠法试剂中的混匀、裂解、结合、洗涤、洗脱。
8联适合大部分国产32道的仪器

8联磁棒套-适合天隆、圆点、黑马、赛默飞等32道核酸提取仪 　

编号

规格

售价￥
说明书下载

SGTL8L

500条/箱

1000.00

圆底

Rnasin(核糖核酸酶抑制剂或RNA酶抑制剂)

编号

规格(40U/ul)

售价￥
ZP00801

1000U(25ul)

200
ZP00802

5000U(125ul)

800
ZP00803 1万U(250ul) 1500
ZP00804
4万U(1ml)

3600
　
相关试剂
抽提试剂盒...
反转录试剂盒...
dNTPs...
Taq酶...
DEPC...
枪头、离心管...
RNA酶抑制剂概述
RNasin 是从人胎盘中提取的特异性RNA酶抑制剂，分子量为 51,000 道尔顿的蛋白质，等电点 pH 值为 4.7 。它能特异地与 RNase 以 300 的抑制常数 (ki) 以非共价键结合形成复合体而使 RNase 失去活性。在缓冲液为 0 -0.5M NaCl ， pH5-8 的条件下保持其活性， pH7.8 时活性最高。经严格质量检验，该产品为电泳纯，无 RNase 、 Nickase 污染，比活为 100,000 单位 / 毫克蛋白，达到国际标准。

RNA酶抑制剂特性
1. 抑制一般的真核 RNase 包括 RNaseA 、 B 、 C 和人胎盘 RNase ；
2. 不抑制 RNase H ， S1 核酸酶， SP6 ， T7 和 T3 RNA 聚合酶， AMV 或 M-MLV 反转录
酶， Taq DNA 聚合酶， RNase T1 ；
3. 活性 pH 范围宽广，但需要 1mM DTT 以保持其活性。

RNA酶抑制剂应用
1. 用在有潜在 RNase 污染的地方。
2. 在 cDNA 合成中保护 mRNA 。
3. 体外转录系统、翻译系统，保护 mRNA 。
4. 用于多核糖体的活性、产量增加。

5. 增进体外病毒复制。
6. 促进同源体系中的 RNA 翻译。
7. 制备无 RNase 的抗体。
8. 提高 Riboprobe (R) 系统 RNA 合成反应的得率。
浓度 20-40u/ul 。
RNA酶抑制剂单位定义
抑制 5ng RNase A 活性的 50 ％所需酶量为一单位。

储藏缓冲液

20mM HEPES-KOH pH7.6, 50mM KCl, 8mM DTT, 50% 甘油。

RNA酶抑制剂对核酸酶的选择性抑制